Otu n'ime uru ndị bụ isi nke omenala cell bụ ikike ịmegharị kemịkalụ anụ ahụ nke mmepụta cell (ya bụ okpomọkụ, pH, nrụgide osmotic, O2 na CO2 esemokwu) na gburugburu ebe obibi physiological (ie hormone na ntinye uche).Na mgbakwunye na okpomọkụ, a na-achịkwa gburugburu ebe obibi omenala site n'aka onye na-eto eto.
Ọ bụ ezie na gburugburu physiological nke omenala adịghị anya dị ka gburugburu anụ ahụ na nke kemịkal, nghọta ka mma nke ihe ndị dị na serum, nchọpụta nke ihe ndị na-eto eto chọrọ maka mmụba, na nghọta ka mma nke microenvironment nke mkpụrụ ndụ na omenala.(ya bụ mmekọrịta cell-cell, mgbasa ozi gas, mmekọrịta na matriks) ugbu a na-enye ohere ịmepụta ụfọdụ ahịrị sel na mgbasa ozi na-enweghị ọbara.
1.Culture gburugburu ebe obibi na-emetụta uto cell
Biko mara na ọnọdụ omenala cell dị iche maka ụdị sel ọ bụla.
Nsonaazụ nke ịwepụ na ọnọdụ omenala achọrọ maka otu ụdị cell sitere na ngosipụta nke phenotypes na-adịghị mma ruo ọdịda zuru oke nke omenala cell.Ya mere, anyị na-akwado ka ị mara ahịrị cell ị nwere mmasị na ya ma soro ntuziaka enyere maka ngwaahịa ọ bụla ị na-eji na nnwale gị.
2.Nkpachapụ anya maka ịmepụta gburugburu omenaala cell kachasị maka sel gị:
Media omenala na serum (lee n'okpuru maka ozi ndị ọzọ)
pH na CO2 ọkwa (lee n'okpuru maka ozi ndị ọzọ)
Zụlite plastik (lee n'okpuru maka ozi ndị ọzọ)
Okpomọkụ (lee n'okpuru maka ozi ndị ọzọ)
2.1 Mgbasa ozi Omenala na Ọbara
Usoro omenala bụ akụkụ kachasị mkpa nke gburugburu ebe obibi omenala, n'ihi na ọ na-enye ihe oriri, ihe ndị na-eto eto na hormones dị mkpa maka uto cell, ma na-achịkwa pH na nrụgide osmotic nke omenala.
Ọ bụ ezie na a na-eji usoro mgbasa ozi sitere n'okike enwetara site na nchịkọta anụ ahụ na mmiri mmiri ahụ, a na-eme nyocha mbụ nke omenala cell, mkpa maka nhazi nhazi, àgwà mgbasa ozi, na ụbara ọchịchọ kpatara mmepe nke mgbasa ozi doro anya.Ụdị mgbasa ozi atọ bụ isi bụ mgbasa ozi basal, mgbasa ozi serum na-ebelata na mgbasa ozi na-enweghị serum, na ha nwere ihe dị iche iche chọrọ maka mgbakwunye serum.
2.1.1 Basic ọkara
Omenala sel Gibco
Ọtụtụ ahịrị sel na-eto nke ọma na mgbasa ozi bụ isi nwere amino acid, vitamin, nnu inorganic, na isi mmalite carbon (dị ka glucose), mana usoro mgbasa ozi ndị a bụ isi a ga-agbakwunyerịrị na serum.
2.1.2 Belata ọkara serum
Kalama nwere Gibco Low Serum Ọkara
Usoro ọzọ iji belata mmetụta ọjọọ nke serum na nyocha omenala cell bụ iji usoro mgbasa ozi belatara ọbara.Mbelata ọbara ọbara bụ usoro nrịbama bụ isi nke bara ụba na nri na ihe sitere n'anụmanụ, nke nwere ike ibelata ọnụọgụ ọbara achọrọ.
2.1.3 Ọkara enweghị ọbara
Kalama na Gibco na-enweghị ọbara ọbara
Ọkara na-enweghị ọbara (SFM) na-egbochi ojiji nke serum anụmanụ site na dochie serum na nri kwesịrị ekwesị na usoro homonụ.Ọtụtụ omenala ndị bụ isi na ahịrị sel nwere usoro usoro ihe na-enweghị serum, gụnyere Chinese Hamster Ovary (CHO) recombinant protein mmepụta ahịrị, ahịrị mkpụrụ ndụ hybridoma dị iche iche, ahịrị ahụhụ Sf9 na Sf21 (Spodoptera frugiperda), yana maka ndị ọbịa maka mmepụta nje. (dịka ọmụmaatụ, 293, VERO, MDCK, MDBK), wdg Otu n'ime uru ndị bụ isi nke iji usoro na-enweghị ọbara ọbara bụ ikike ime ka onye na-ahụ maka ihe na-ahọrọ maka ụdị sel kpọmkwem site na ịhọrọ nchikota kwesịrị ekwesị nke ihe uto.Tebụlụ na-esonụ na-edepụta uru na ọghọm dị na mgbasa ozi na-enweghị serum.
Uru
Mee ka o doo anya
Arụmọrụ na-agbanwe agbanwe karịa
Nchacha dị mfe na nhazi ala
Nyochaa ọrụ cell nke ọma
Na-abawanye mmepụta
Mma njikwa mmeghachi omume physiological
Nchọpụta mgbasa ozi cell emelitere
Mwepu
Cell ụdị kpọmkwem ọkara usoro chọrọ
Achọrọ ịdị ọcha reagent dị elu
Ịdị nwayọọ na uto
2.2.1 pH
Ọtụtụ ahịrị cell mammalian nkịtị na-eto nke ọma na pH 7.4, na ọdịiche dị n'etiti ahịrị sel dị iche iche pere mpe.Otú ọ dị, egosiwo ụfọdụ ahịrị sel ndị gbanwere ka ọ na-eto nke ọma na gburugburu acidic (pH 7.0 - 7.4), ebe ụfọdụ ahịrị sel fibroblast nkịtị na-ahọrọ ebe dị ntakịrị alkaline (pH 7.4 - 7.7).Ahịrị sel ụmụ ahụhụ dịka Sf9 na Sf21 na-eto nke ọma na pH 6.2.
2.2.2 CO2 larịị
Onye na-eto eto na-achịkwa pH nke omenala ma na-echekwa sel ndị dị na omenala iji guzogide mgbanwe na pH.Ọtụtụ mgbe, a na-enweta nchekwa a site na ịnwe organic (dịka ọmụmaatụ, HEPES) ma ọ bụ ihe nchekwa dabere na CO2-bicarbonate.N'ihi na pH nke ọkara na-adabere na nguzozi siri ike nke carbon dioxide gbazere (CO2) na bicarbonate (HCO3-), mgbanwe na ikuku CO2 ga-agbanwe pH nke ọkara.Ya mere, mgbe ị na-eji ihe mkpuchi nke nwere CO2-bicarbonate dabeere na ihe nchekwa, ọ dị mkpa iji CO2 exogenous, karịsịa mgbe ị na-azụ mkpụrụ ndụ na efere omenala mepere emepe ma ọ bụ na-eme ka ahịrị sel gbanwee n'ogo dị elu.Ọ bụ ezie na ọtụtụ ndị nchọpụta na-ejikarị 5-7% CO2 na ikuku, ọtụtụ nyocha omenala cell na-ejikarị 4-10% CO2.Otú ọ dị, onye ọ bụla na-ajụ nwere ihe atụ aro CO2 esemokwu na bicarbonate itinye uche iji nweta pH ziri ezi na nrụgide osmotic;maka ozi ndị ọzọ, biko rụtụ aka na ntuziaka onye nrụpụta ọkara.
2.3 Ịzụlite plastik
Plastic omenala cell dị n'ụdị, nha na elu dị iche iche iji dabara ngwa ọdịnala cell dị iche iche.Jiri ntuziaka elu plastik omenala cell na ntuziaka akpa omenala cell dị n'okpuru iji nyere gị aka ịhọrọ plastik ziri ezi maka ngwa omenala cell gị.
Lelee plastic omenala Thermo Scientific Nunc cell (njikọ mgbasa ozi)
2.4 Okpomọkụ
Okpomọkụ kachasị mma maka ọdịbendị cell na-adabere n'ụzọ dị ukwuu na okpomọkụ nke anụ ahụ nke onye na-elekọta ya bụ ebe mkpụrụ ndụ dịpụrụ adịpụ, na n'ókè dị nta na mgbanwe mgbanwe okpomọkụ (dịka ọmụmaatụ, okpomọkụ akpụkpọ anụ nwere ike ịdị ala karịa nke ọkpụkpụ ọkpụkpụ). ).Maka omenala cell, ikpo oke ọkụ bụ nsogbu dị njọ karịa ikpo ọkụ.Ya mere, a na-edobe okpomọkụ dị na incubator ntakịrị n'okpuru okpomọkụ kachasị mma.
2.4.1 okpomọkụ kacha mma maka ahịrị sel dị iche iche
A na-edobe ọtụtụ ahịrị sel mmadụ na anụ mammali na 36°C ruo 37°C maka uto kacha mma.
A na-akọ mkpụrụ ndụ ụmụ ahụhụ na 27 Celsius C maka uto kacha mma;ha na-eto nwayọọ nwayọọ na okpomọkụ dị ala na okpomọkụ n'etiti 27°C na 30°C.N'elu 30 Celsius, ike nke mkpụrụ ndụ ụmụ ahụhụ na-ebelata, ọ bụrụgodị na ọ laghachi azụ na 27 Celsius, mkpụrụ ndụ agaghị agbake.
Ahịrị cell Avian chọrọ 38.5 Celsius C iji rute oke uto.Ọ bụ ezie na enwere ike idobe mkpụrụ ndụ ndị a na 37 Celsius, ha ga-eto nwayọ nwayọ.
Ahịrị sel ndị e nwetara site na anụmanụ nwere ọbara oyi (dị ka amphibians, azụ mmiri oyi) nwere ike ịnabata oke okpomọkụ nke 15°C ruo 26°C.
Oge nzipu: Feb-01-2023